Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad

Cytoplazmatyczne długie dwuniciowe RNA (dsRNA) jest cięte przez Dicer na małe interferujące RNA (siRNA), które jest włączone do RISC, co powoduje cięcie i degradację specyficznego docelowego mRNA. Regulacja ekspresji genów poprzez interferencję RNA odbywa się za pomocą mikroRNA (miRNA) lub małego interferującego RNA (siRNA) (rysunek 1). W jądrze endogenne dwuniciowe segmenty RNA są cięte na krótkie, dwuniciowe struktury prekursorów RNA w kształcie spinki do włosów (w przybliżeniu od 60 do 70 nukleotydów) 4,5 przez enzym Droha RNazy III. Te prekursory przenoszą się do cytoplazmy, gdzie Dicer, również enzym RNazy III, rozszczepia je na dojrzałe fragmenty dwuniciowego RNA (miRNA), od 19 do 21 nukleotydów każdy.6 Translacyjna represja lub degradacja informacyjnego RNA (mRNA) zachodzi, gdy miRNA wiąże się do kompleksu wyciszającego indukowanego przez RNA (RISC) .7,8 Produkcja siRNA odbywa się w podobny sposób, chociaż przetwarzanie metodą Drosha nie jest konieczne.
Opisano zmiany miRNA w ludzkich rakach, ale regulacja tych cząsteczek jest niejasna. W guzach jajnika stwierdzono zmniejszoną ekspresję znacznej części miRNA, 10-13, ale dalsze skutki tego zmniejszenia nie są znane. Niemniej jednak odkrycia te potwierdzają hipotezę, że miRNA odgrywają zasadniczą rolę w progresji nowotworu.10-12 Badaliśmy, czy zmienione poziomy mRNA Dicer i Drosha, składniki mechanizmu interferencji RNA, są związane z klinicznym wynikiem w raku jajnika.
Metody
Linie komórkowe
Pochodna, źródła i utrzymanie linii komórkowych raka jajnika wykorzystanych w tym badaniu zostały opisane wcześniej.14 Linie to HeyA8, SKOV3ip1, A2780-Par, IGROV, EG, 222, OVCAR3 i OVCAR420 (źródła, patrz Dodatek dodatkowy, dostępny wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org).
Próbki nowotworowe
Po zatwierdzeniu badania przez Instytucjonalną Komisję Rewizyjną i uzyskaniu pisemnej świadomej zgody od pacjentów na wykorzystanie próbek klinicznych do badań uzyskano 111 próbek inwazyjnego nabłonkowego raka jajnika z MD Anderson Cancer Center Tumor Bank oraz Brigham and Women s Gynecologic Oncology Tumor Bank. Przed pobraniem tych próbek otrzymano 11 łagodnych próbek nabłonka jajnika jako kontrole z mikroskopijnych próbek zatopionych w parafinie lub zeskoków nabłonka pobranych po chirurgicznym usunięciu.
Dane dotyczące wyników klinicznych uzyskano z zapisów pacjentów. Odpowiedzi na wstępną chemioterapię rejestrowano jako wrażliwe (jeśli wystąpiła normalizacja poziomu CA-125, negatywne wyniki dotyczące laparotomii o drugim wyglądzie lub oba w ciągu 6 miesięcy po zakończeniu początkowej chemioterapii) lub oporne lub oporne (jeśli wystąpiła progresja). lub nawrót w ciągu 6 miesięcy po zakończeniu początkowej chemioterapii).
Dicer i mRNA Drosha
Zastosowano ilościowy test odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy (RT-PCR) do pomiaru mRNA Dicer i Drosha w RNA wyekstrahowanym z linii komórek jajnika i nowotworów jajnika. Ekspresję białka badano we wszystkich liniach komórkowych za pomocą Western blot (patrz dodatek dodatkowy) i w guzach jajnika za pomocą metod immunohistochemicznych
[podobne: odcinek st, humektant, przetoka odbytu zdjęcia ]

Powiązane tematy z artykułem: humektant odcinek st przetoka odbytu zdjęcia