Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 8

Mutacje genu Dicer znaleziono w Caenorhabditis elegans 39 iu ludzi, a delecje locus genu Dicer wykryto w niektórych przedrakowych i inwazyjnych gruczolakorakach płuc.31 Nasze analizy mutacyjne wykazały, że zmiany w genomowym DNA prawdopodobnie nie uwzględniają zmienności w Dicer i poziomy Drosha. Odkryliśmy, że mutacje pojedynczych nukleotydów mogą występować w obu genach; jednak rola funkcjonalna takich mutacji pozostaje niejasna. W liniach komórkowych raka piersi istnieją dwie formy Dicer, ze względu na alternatywne mechanizmy splicingu, które wydają się wpływać na stabilność białka Dicer40. Nie stwierdzono metylacji DNA genu Dicer w małej podgrupie próbek raka płuca .30 W miarę jak funkcja miRNA w genezie guzów staje się jaśniejsza, dalsze badania będą potrzebne, aby wyjaśnić regulację i stabilność mechanizmu interferencji RNA. Nasze odkrycia mają wpływ na rozwój leczenia raka jajnika, które są oparte na interferencji RNA. Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 8”

Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 7

Konkretnie, porównaliśmy konstrukty shRNA (wykazujące stabilne wyciszanie genów) z krótszymi fragmentami siRNA (które mają przejściowe wyciszanie genów) (Figura 3). W porównaniu z konstruktami kontrolnymi (niedocelowymi), transfekcja siRNA zmniejszyła poziomy galektyny-3 w liniach komórkowych o niskiej ekspresji Dicer: HeyA8, która wykazała redukcję o 78% w stosunku do poziomu kontrolnego, oraz SKOV3ip1, zmniejszoną o 95% od kontroli poziom. Natomiast w tych komórkach zanotowano złe wyciszanie za pomocą shRNA (odpowiednio 8% i 4%). W komórkach OVCAR3 i 222, które mają wysoką ekspresję Dicer, wyciszanie galektyny-3 o 62% do 73% w porównaniu z poziomami kontrolnymi obserwowano dla obu konstruktów siRNA i shRNA. Dyskusja
Stwierdziliśmy, że ekspresja mRNA Dicer i Drosha jest zmienna wśród inwazyjnych nabłonkowych próbek raka jajnika oraz linii komórkowych raka jajnika i że są one znacząco związane z przeżyciem, co wskazuje, że poziomy mRNA Dicer i Drosha w komórkach raka jajnika są klinicznie istotne. Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 7”

Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 6

Obniżony poziom mRNA dla Dicer był wskaźnikiem złego rokowania (współczynnik ryzyka, 2,10, 95% CI, 1,15 do 3,85, P = 0,02). Niski poziom mRNA Drosha nie był jednak niezależnym czynnikiem prognostycznym przeżycia (współczynnik ryzyka, 1,22, 95% CI, 0,69 do 2,16, P = 0,50). Po sparowaniu w modelu interakcji poziomy niskiego Dicer i niskiego poziomu mRNA Drosha miały większy związek z obniżonym czasem przeżycia (współczynnik ryzyka, 4,00, 95% CI, 1,82 do 9,09, P <0,001), niż jeden sam. Aby potwierdzić nasze wyniki, wykorzystaliśmy wcześniej podane dane mikromacierzy do porównania ekspresji genów Dicer i Drosha z przeżyciem u 132 pacjentów z rakiem jajnika.19 Podobnie jak w naszych początkowych ustaleniach, zwiększone przeżycie było związane z wysoką ekspresją mRNA Drosha (współczynnik ryzyka, 0,55 95% CI, 0,34 do 0,89, P = 0,02) i mRNA Dicer (współczynnik ryzyka, 0,53, 95% CI, 0,33 do 0,85, P = 0,008) (Figura 2B).
Aby zbadać, czy to powiązanie występuje również w przypadku innych nowotworów, zmierzono względne wskaźniki ekspresji dla Dicer i Drosha w mikromacierzach z kohortami 91 pacjentów z rakiem płuc19 i 129 pacjentów z rakiem sutka. Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 6”

Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 5

W porównaniu z nietransformowanymi komórkami nabłonka powierzchniowego jajnika, 50% linii komórkowych raka jajnika miało obniżone poziomy zarówno mRNA Dicer (do między 50 do 8% poziomu kontrolnego), jak i mRNA Drosha (między 91 a 7% kontroli; poziom). Podobnie jak w przypadku nowotworów jajnika, linie komórkowe raka jajnika miały poziomy mRNA, które były zgodne z poziomami białka (Figura 2 w Dodatkowym dodatku). Stowarzyszenia kliniczne
Tabela 1. Tabela 1. Wyjściowa charakterystyka 111 pacjentów z inwazyjnym nabłonkowym rakiem jajnika. Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad 5”

Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika czesc 4

Test Wilcoxona zastosowano do porównania rozkładów rangowych zmiennych ciągłych niezgodnych z założeniami normalności. Tabele kontyngencji i dokładny test Fishera posłużyły do oceny związku między śmiercią a zmiennymi kategorycznymi. Sporządzono wykresy Kaplana-Meiera i zastosowano test log-rank w celu określenia różnic między krzywymi przeżycia zgodnie z poziomem ekspresji Dicer i Drosha. Analizy wielowymiarowe przeprowadzono przy użyciu modelu proporcjonalnych hazardów Coxa, aby zbadać wpływ ekspresji Dicer i Drosha na śmierć z powodu choroby, dostosowując się do innych zmiennych towarzyszących. Poprawki Bonferroniego zastosowano w analizach obejmujących wiele porównań. Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika czesc 4”

Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika cd

Ilościowy RT-PCR przeprowadzono za pomocą zestawu do oznaczania ekspresji genu TaąMan (Applied Biosystems) z primerami RNA Dicer, Drosha lub 18s (Applied Biosystems), jak opisano wcześniej.15,16 Ostateczne poziomy mRNA przekształcono do stosunków o zmniejszonej ekspresji (.1) lub zwiększonej ekspresji (> 1) w stosunku do poziomu mRNA Dicer i Drosha w normalnym nabłonku jajnika. Analiza immunohistochemiczna
Szkiełka poddano deparafinizacji i ponownie uwodniono przy pomocy kolejnych płukań w ksylenie i etanolu. Odzyskiwanie antygenu przeprowadzono w szybkowarze w 90 ° C z użyciem roztworu Borg Decloaker (Biocare Medical). Preparaty następnie inkubowano z pierwszorzędowymi przeciwciałami przeciwko Dicer (rozcieńczenie 1: 100, Sigma) lub Drosha (1: 200, Abcam) przez noc, a następnie inkubowano z polimerem peroksydazy mysia-królik-chrzan (MR-HRP, Biocare Medical) i 3 Substrat 3 -diaminobenzydynowy (Phoenix Biotechnologies). Wybarwione szkiełka zostały ocenione przez dwóch badaczy, którzy nie byli świadomi wyników RT-PCR, na podstawie oceny histochemicznej (z wynikiem> 100 zdefiniowanym jako wysoka ekspresja i .100, niska ekspresja), zgodnie z metodą opisaną przez McCarty i wsp., 17,18, który uwzględnia zarówno intensywność zabarwienia, jak i procent zabarwionych komórek. Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika cd”

Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad

Cytoplazmatyczne długie dwuniciowe RNA (dsRNA) jest cięte przez Dicer na małe interferujące RNA (siRNA), które jest włączone do RISC, co powoduje cięcie i degradację specyficznego docelowego mRNA. Regulacja ekspresji genów poprzez interferencję RNA odbywa się za pomocą mikroRNA (miRNA) lub małego interferującego RNA (siRNA) (rysunek 1). W jądrze endogenne dwuniciowe segmenty RNA są cięte na krótkie, dwuniciowe struktury prekursorów RNA w kształcie spinki do włosów (w przybliżeniu od 60 do 70 nukleotydów) 4,5 przez enzym Droha RNazy III. Te prekursory przenoszą się do cytoplazmy, gdzie Dicer, również enzym RNazy III, rozszczepia je na dojrzałe fragmenty dwuniciowego RNA (miRNA), od 19 do 21 nukleotydów każdy.6 Translacyjna represja lub degradacja informacyjnego RNA (mRNA) zachodzi, gdy miRNA wiąże się do kompleksu wyciszającego indukowanego przez RNA (RISC) .7,8 Produkcja siRNA odbywa się w podobny sposób, chociaż przetwarzanie metodą Drosha nie jest konieczne.
Opisano zmiany miRNA w ludzkich rakach, ale regulacja tych cząsteczek jest niejasna. Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika ad”

Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika

Zbadaliśmy Dicer i Drosha, elementy mechanizmu interferencji RNA, w raku jajnika. Metody
Mierzono poziomy matrycowego RNA (mRNA) Dicer i Drosha w próbkach inwazyjnego nabłonkowego raka jajnika od 111 pacjentów, stosując ilościowy test odwrotnej transkryptazy-reakcji polimerazy i porównywano wyniki z wynikami klinicznymi. Walidację przeprowadzono przy użyciu opublikowanych danych mikromacierzy z kohort pacjentów z rakiem jajnika, piersi i płuc. Mutacyjne analizy genomowego DNA z genów Dicer i Drosha przeprowadzono w podgrupie próbek raka jajnika. Testy funkcjonalne zależne od Dicer przeprowadzono za pomocą transfekcji in vitro małym interferującym RNA (siRNA) i krótkim RNA o strukturze spinki do włosów (shRNA). Continue reading „Dicer, Drosha i wyniki u pacjentów z rakiem jajnika”

Tromboliza podczas resuscytacji w przypadku pozaszpitalnego zatrzymania krążenia ad 7

Chociaż terapia trombolityczna rozpuszcza skrzepliny wewnątrznaczyniowe, perfuzja ważnych narządów podczas resuscytacji krążeniowo-oddechowej jest ograniczona, co mogło utrudniać dostarczanie tenekteplazy do skrzepów krwi w tętnicach wieńcowych. Utrwalone ciśnienie perfuzji może być konieczne w celu wywołania korzyści z leczenia trombolitycznego, co sugeruje obniżona skuteczność leczenia trombolitycznego u pacjentów z zawałem mięśnia sercowego z uniesieniem odcinka ST, z ciężkim niedociśnieniem lub wstrząsem kardiogennym. [31] Ryzyko krwawienia śródczaszkowego w tym badaniu było większe niż oczekiwano po zastosowaniu leczenia trombolitycznego po zawale mięśnia sercowego.32 Nie można było uzyskać informacji dotyczących możliwych przeciwwskazań do zastosowania czynnika litycznego u pacjentów z zatrzymaniem krążenia. Co ważniejsze, krwotok wewnątrzczaszkowy może spowodować zatrzymanie krążenia. W rzeczywistości, badacze z ośrodka zgłosili krwawienie wewnątrzczaszkowe jako przyczynę zatrzymania krążenia u sześciu pacjentów, chociaż nie można było z całą pewnością stwierdzić, że taki związek przyczynowy. Continue reading „Tromboliza podczas resuscytacji w przypadku pozaszpitalnego zatrzymania krążenia ad 7”

Tromboliza podczas resuscytacji w przypadku pozaszpitalnego zatrzymania krążenia ad 6

Nie było znaczących różnic między grupami tenekteplazy i placebo w punktach końcowych skuteczności, które ocenialiśmy, w tym pierwszorzędowy punkt końcowy przeżycia 30 dni i drugorzędowe punkty końcowe powrotu spontanicznego krążenia, przyjęcie do szpitala, 24-godzinne przeżycie, przeżycie do wypisu ze szpitala i wyniku neurologicznego. Nasze badanie nie potwierdziło korzystnego wpływu leczenia trombolitycznego podczas resuscytacji krążeniowo-oddechowej, które opisano w kilku poprzednich raportach. 19-19-21 Poprzednie badania były jednak znacznie mniejsze niż obecne badanie, a większość z nich nie była randomizowana. Zapisaliśmy tylko pacjentów, u których stwierdzono aresztowanie, które przypuszczalnie pochodzi z serca. Ponadto, środek trombolityczny stosowany w niniejszym badaniu był tenekteplazą, podczas gdy alteplaza lub streptokinaza była stosowana w niektórych z poprzednich badań. Continue reading „Tromboliza podczas resuscytacji w przypadku pozaszpitalnego zatrzymania krążenia ad 6”